تولید سلول های ناپذیرا برای مطالعه hiv-۱ vif
Authors
abstract
سابقه و هدف: مولکول apobec3g ، به عنوان فاکتور سلولی دخیل در میانکنش با vif hiv-1 عمل میکند که برای بررسی میانکنش آن با vif hiv-1 ، از سلولهای ناپذیرای طبیعی و ذاتی مثل h9 و pbmc انسانی مولد apobec3g استفاده میشود. به دلیل ناکارآمدی آنها در این نوع بررسیها، نیازمند سلولهای ناپذیرایی بودیم که به طور ثابت و به میزان بالا تولید apobec3g بنماید. لذا از سلولهای 293t برای ایجاد این دسته از سلولها استفاده شد. مواد و روشها: از سلولهای 293t برای تولید سلولهای ناپذیرا ( non-permissive ) استفاده شد که این کار پس از ترانسفکشن با کلونهای مولکولی pcdna-apo3g صورت گرفت و سپس با روش وسترن بلاتینگ، میزان بیان آنها بررسی شد. همچنین فعالیت رپلیکاسیون hiv-1 با استفاده از rt assay و عفونتزایی آنها به وسیله magi assay بررسی شد. نتایج: در این مطالعه، تعدادی رده سلولی 293t ابرازکننده یک فاکتور انسانی ضد hiv-1 به نام apobec3g تهیه شد. به آسانی از طریق ایمونوبلاتینگ اثبات شد که چهار کلون از هفت کلون مورد بررسی، apobec3g را ابراز میکنند. به ویژه مشخص شد که دو کلون (a3g-c1,a3g-c4) تولید مقادیر بالاتری از apobec3g را در مقایسه با کلونهای سلولی pooled مینماید. اثربخشی ترانسفکشن همه این کلونها مشابه سلولهای والد بود؛ با تولید سطح قابل قیاسی از ویریونها در نتیجه ترانسفکشن کلونهای dna ویروسی نوع وحشی و vif منفی ( - vif ). به علاوه سطح ابرازی apobec3g در بهترین رده سلولی (a3g-c1) ، بسیار بالاتر از سطح ابرازی در یک رده سلولی لنفوسیتی apobec3g مثبت و سلولهای تکهستهای خون محیطی بود. در نهایت دخول apobec3g در ویریونهای تولید شده در a3g-c1 مونیتور و پیگیری شد. apobec3g به راحتی در ذرات ویروسی پروژنی در نتیجه ترانسفکشن کلون پروویروسی vif منفی، و نه در کلون نوع وحشی، تشخیص داده شد. نتیجهگیری: این نتایج مشخص ساختند که رده سلولی جدید تولید شده برای مطالعات مختلف بررسی میانکنش apobec3g انسانی و hiv-1 vif مفید است.
similar resources
تولید سلول های ناپذیرا برای مطالعه HIV-1 vif
سابقه و هدف: مولکول APOBEC3G ، به عنوان فاکتور سلولی دخیل در میانکنش با vif HIV-1 عمل میکند که برای بررسی میانکنش آن با vif HIV-1 ، از سلولهای ناپذیرای طبیعی و ذاتی مثل H9 و PBMC انسانی مولد APOBEC3G استفاده میشود. به دلیل ناکارآمدی آنها در این نوع بررسیها، نیازمند سلولهای ناپذیرایی بودیم که به طور ثابت و به میزان بالا تولید APOBEC3G بنماید. لذا از سلولهای 293T برای ایجاد این دسته از سلول...
full textAPOBEC3F determinants of HIV-1 Vif sensitivity.
HIV-1 Vif counteracts restrictive APOBEC3 proteins by targeting them for proteasomal degradation. To determine the regions mediating sensitivity to Vif, we compared human APOBEC3F, which is HIV-1 Vif sensitive, with rhesus APOBEC3F, which is HIV-1 Vif resistant. Rhesus-human APOBEC3F chimeras and amino acid substitution mutants were tested for sensitivity to HIV-1 Vif. This approach identified ...
full textSuppression of APOBEC3-mediated restriction of HIV-1 by Vif
The APOBEC3 restriction factors are a family of deoxycytidine deaminases that are able to suppress replication of viruses with a single-stranded DNA intermediate by inducing mutagenesis and functional inactivation of the virus. Of the seven human APOBEC3 enzymes, only APOBEC3-D, -F, -G, and -H appear relevant to restriction of HIV-1 in CD4+ T cells and will be the focus of this review. The rest...
full textInsight into the HIV-1 Vif SOCS-box–ElonginBC interaction
The HIV-1 viral infectivity factor (Vif) neutralizes cell-encoded antiviral APOBEC3 proteins by recruiting a cellular ElonginB (EloB)/ElonginC (EloC)/Cullin5-containing ubiquitin ligase complex, resulting in APOBEC3 ubiquitination and proteolysis. The suppressors-of-cytokine-signalling-like domain (SOCS-box) of HIV-1 Vif is essential for E3 ligase engagement, and contains a BC box as well as an...
full textHIV-1 and HIV-2 Vif interact with human APOBEC3 proteins using completely different determinants.
UNLABELLED Human APOBEC3 (A3) restriction factors provide intrinsic immunity against zoonotic transmission of pathogenic viruses. A3D, A3F, A3G, and A3H haplotype II (A3H-hapII) can be packaged into virion infectivity factor (Vif)-deficient HIVs to inhibit viral replication. To overcome these restriction factors, Vif binds to the A3 proteins in viral producer cells to target them for ubiquitina...
full textتوسعه روش nasba-elisa برای تشخیص hiv-۱ rna
چکید ه سابقه و هدف با شروع عفونت hiv-1 ، اولین مارکری که در خون آشکار می شود، rna ویروسی می باشد. از میان روش های موجود که شناسایی rna را هدف قرار می دهند؛ متداول ترین روش ها nasba و rt-pcr هستند. nasba مزیت های متعددی نسبت به rt-pcr ارایه می کند. در این پژوهش، واکنش nasba در ترکیب با روش آشکارسازی آسان و حساس الایزا، برای تشخیص و آشکارسازی hiv-1 rna مورد استفاده قرار گرفت. مواد و روش ها ...
full textMy Resources
Save resource for easier access later
Journal title:
فیضجلد ۱۲، شماره ۴، صفحات ۲۲-۲۸
Keywords
Hosted on Doprax cloud platform doprax.com
copyright © 2015-2023